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Título Amplificación, clonación y expresión de un fragmento de la proteína de envoltura gp46 del virus linfotrópico humano HTLV-1 y amplificación de un segmento del epitope V3 de envoltura de VIH-1Tesis o Trabajo de grado / Impreso - Tesis o Trabajo de grado
Autor(es) Ordóñez Suárez, Paula (Autor)
Garcia Vallejo, Felipe (Director de Tesis o Trabajo de Grado)
Publicación Colombia : Universidad del Valle, 2002
Descripción Física 75h. il. ; papel ; pasta dura
Idioma Español;
Clasificación(es) 547
Materia(s) Virus linfotropico de celulas T humanas Tipo I (HTLV-I); Química orgánica; Glicoproteinas;
Nota(s) Tesis (Químico) -- Universidad del Valle. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas. Cali, 2002
RESUMEN: La proteina de envoltura gp46 del Virus Linfotrópico humano tipo 1 de las celulas T (HTLV-I) posee una gran capacidad inmunogenetica, lo cual le confiere gran importancia tanto en el diagnóstico como en el desarrollo de una potencial vacuna contra el virus. Con el fin de proponer nuevas formas seguras de obtencion de un epitope de esta proteina, se desarrollo una metodología de producción a partir del uso de técnicas del DNA recombinante. Mediante reaccion en cadena de la Polimerasa (PCR) se amplificó el segmento 5622-5765 nts (161-206 a.a. ) de la gp46, obteniendo un fragmento de 144 bp. Los primeros utilizados en la maplificaicon fueron: RENV-I-1+ (5´TT TAC TCA AAA AGT TCC ACG) y RENV-1-2- (5´GGG GCG GTG GGA GGC AGT TGG). El fragmento obtenido se clono en el vector de Pcr2.1 y se transformo en celulas competentes de Escherichia coli DH5-alfa. Este fragmento fue reamplificado para realizar una transfeccion en un sisteam de Baculovirus con un promotor simple de polihedrina. El empleo de este vector permitio la expresion de la proteina de manera segura en celulas de insecto Mamaestrae brassicae (MB8003). La complementacion del proceso incluyo la purificaicon de la proteina y los ensayos de Western Blot (WB) y ELISA, que permitieron probar la capacidad inmunogenica de la proteina obtenida. En el caso del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1), se realizo la ampliacion mediante PCR de una region inmunologicamente importante del epitope V3 de envoltura. Los primeros empleados fueron: HIV-V3+ 5´-AGG ACC ATG TAC AAA TGT CAG CAC A-3´y HIV-V3- 5´-AGA AAA ATT CCC CTC CAC AAT TA -3´. El resultado de la amplificaicon fue un frafmento de 445bp.Este proceso abre las puertas a nuevas formas de diagnostico del HTLV-1 Y EL HIV-1, puesto que las proteinas purificadas pueden ser empeladas en la elaboracion de estuches de diagnostico como ELISA y pruebas en fase solida.
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0271182Biblioteca Mario Carvajal - Melendez - CaliDepósito - Biblioteca Mario Carvajal #4 Palmas3148 O656DisponibleTesis